一、细胞培养条件

细胞名称：HL-7702人肝正常细胞[L-02]
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：首次建议1:2传代，以适配细胞的生长状态。传代时注意每两天更换培养基。

备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买环亚集团·AG88的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，应尽快培养至理想状态，并灌满完全培养液，封好瓶口，以确保细胞在运输过程中的稳定性。冲洗时使用75%酒精消毒整个细胞瓶，后放入超净台进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，使细胞恢复稳定后进行处理。显微镜下观察细胞生长状态，最好拍摄40x、100x、200x的细胞照片，前三天的照片为重要售后依据。传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶用自配的完全培养基进行对比培养，换液后拧松瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若细胞汇合度未超过80%时，将未用完的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。若细胞密度超过80%，可按照以下步骤进行传代：

弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜观察细胞情况，若大部分细胞脱落，迅速终止消化。
轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，转移至离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清后加1-2ml完全培养基重悬。
按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养基，用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞，使之脱落。
将悬液转移至离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃上清后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中，放入-80℃冰箱保存，若后续转入液氮罐，需先在-80℃存放24小时以上。

c、细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管，快速置于37℃水浴中解冻，观察无结晶后擦拭冻存管外壁。
将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃上清，重悬于5ml完全培养基后接种至T25培养瓶，并放置于37℃、5% CO2培养箱中培养。
第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落，属正常现象。如有过多脱落，可将培养液收集于离心管中，并进行后续处理。操作时需谨慎，确保细胞状态良好。

五、售后政策

1）可重发的情况

若因运输故障造成细胞丢失或污染，务必在规定时间内反馈真实实验结果。具体标准包括细胞在运输过程中受损，收到后未存活或出现明显污染情况，及时提供相关照片及操作步骤以供验证，环亚集团·AG88将承担相应责任并重新发货。

2）不予重发的情况

对于因客户操作不当、非推荐培养体系所引起的细胞问题，环亚集团·AG88将不予以重发。请在操作完成后，保持良好的记录以确保细胞状态良好。

如需了解更多，请访问环亚集团·AG88官方网站。