近期,环亚集团·AG88针对DNBSEQ平台的甲基化建库与测序进行了全面升级,推出了新一代建库产品——MGIEasy全基因组甲基化文库制备试剂盒V30(MGIEasyWholeGenomeMethylationSequencingLibraryPrepKitV30,简称WGMSV30)。WGMSV30基于双链加接头方法,对物理打断获得的DNA片段进行建库,并适配酶法转化,将非甲基化的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U)。与DNBSEQ平台结合后,该试剂盒能够以单碱基的精度解析DNA的甲基化状态,构建详尽的全基因组甲基化图谱。
WGMSV30在许多领域中展现出其高效和准确的全基因组甲基化建库能力,包括大人群的表观组研究、表观遗传基础科研、动植物研究、疾病甲基化标志物筛选以及药物研发等。目前,WGMSV30已适配MGISEQ-2000平台,并结合该平台的新升级算法,测序时无需添加平衡文库,能够实现纯甲基化文库的0平衡文库测序。此外,环亚集团·AG88的研发团队已经启动对WGMSV30适配DNBSEQ-T7的最终稳定性测试,更多实测数据将持续发布,敬请期待。
采用3个不同批次的WGMSV30构建NA12878标准品的DNA甲基化文库,未添加平衡文库,并在MGISEQ-2000ECR70(搭配SM测序试剂)和ECR71(搭配SM20测序试剂)进行平行测序。PE150测序下,单lane reads的产出稳定在400M左右,每个文库能获得约120G的原始下机数据,实现了“1库1lane”的理想测序设置,且测序质量良好,其中SM测序试剂的Q30稳定在约89%,而SM20测序试剂的Q30则稳定在约94%,Q40则保持在87%左右。
该试剂盒通过优化转化过程,减少了实验损伤,增加了文库插入片段的长度,更好地支持PE150测序。不同批次的建库试剂盒所构建的NA12878标准品DNA甲基化文库插入片段的主峰高度保持一致,约为280bp。此外,通过优化末端修复反应体系和步骤,显著降低了Reads末端的M-bias碱基个数。在使用SM20版测序试剂结合ECR71软件版本进行实验时,发现不同批次建库试剂盒的NA12878标准品DNA甲基化文库表现出一致的M-bias,BottomStrand和TopStrand的Read1与Read2的甲基化率几乎重合。