在细胞复苏后,如果细胞状态不佳,我们该如何进行调整呢?以下是一些可能导致细胞复苏后状态差的原因及其解决方案,您可以根据实际情况进行及时调整。
1. 细胞冻存不当
如果细胞冻存不当,建议您尝试调整细胞状态,增加培养基中血清的比例,后续再进行传代调整。
2. 自行制备的冻存细胞无活性
在制备冻存细胞时,务必使用传代次数少且处于对数生长期的细胞。此外,提高冻存密度可以有效提升复苏存活率,推荐密度为100~300万细胞/mL。
3. 细胞复苏方法不当
细胞复苏讲究“快融”,快速融化可以减轻细胞所受的损伤。确保冷冻细胞能够迅速解冻,并在接种前使用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。
4. 复苏培养基使用不当
确认培养基在使用前已预热,并尽快移除含有冷冻保护剂的培养基,以防细胞活力下降。
5. 处理细胞时动作不够轻柔
细胞在冻存和复苏过程中容易受到不利影响。避免使用涡旋振荡或用力敲击培养瓶的方法使细胞脱落(昆虫细胞除外),也应防止高速离心处理细胞。
6. 细胞稀释过度
为了改善复苏效果,建议将解冻后的细胞以高密度接种。
7. 冻存液中保护剂未避光保存
如果冻存保护剂未避光储存,可能转变为对细胞有毒的物质。建议更换新的冻存保护剂,并重新冻存细胞。
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