**01 dsRNA是mRNA原液质量控制的关键必检项**
mRNA疫苗是一种利用信使RNA（mRNA）的分子副本来引发免疫反应的疫苗，采用脂质纳米颗粒将RNA封装，保护RNA链并协助其进入细胞。在新冠疫情背景下，mRNA疫苗技术因其在疗效、研发速度、成本及生产可扩展性等方面的显著优势而备受瞩目。mRNA原液的制备和转录是疫苗生产中的关键环节，其质量直接影响疫苗的临床效果。根据CDE发布的《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则》，需严格控制mRNA相关杂质的含量，包括5’非帽化RNA、双链RNA（dsRNA）等，其中dsRNA（双链核糖核酸）在品质检测中尤其重要。在IVT过程中，T7RNA聚合酶可能在DNA模板上进行转录，产生不同类型的dsRNA副产物，包括顺式和反式dsRNA。这些dsRNA杂质可以被细胞内的TLR3和RIG-1等蛋白识别，激活干扰素的产生，这将影响mRNA的翻译效率和记忆免疫。因此，在mRNA疫苗生产过程中，必须严格控制dsRNA的含量，要求生产厂商能够精确检测dsRNA。
**02 ELISA法更适合用于dsRNA定量检测**
目前 dsRNA的检测方法包括dot blot、ELISA、HTRF和HPLC，USP《Analytical Procedures for mRNA Vaccine Quality（Draft Guidelines）》中推荐的有效检测方法为dot blot和ELISA。虽然HPLC法的分辨率和准确度有待提高，但dot blot法操作简单，尽管灵敏度较低。ELISA是目前商业应用最成熟的免疫分析方法，其灵敏度可达到pg/mL水平，广泛应用于医学和生物制药领域。该方法通过双抗体夹心法来实现，结合了抗原抗体反应和酶的催化作用。然而，基于生物素亲和素系统（BAS）的应用可以提高反应的灵敏度。相较于其他方法，ELISA具备更好的特异性和灵敏度，适用于对mRNA疫苗的生产进行严格的dsRNA检测，尤其是考虑到**环亚集团·AG88**的技术需求，开发兼具灵敏性的dsRNAELISA检测试剂盒显得尤为关键。
**03 dsRNA ELISA定量检测试剂盒开发的必要性**
在开发dsRNA ELISA定量检测试剂盒的过程中，标准品的制备、定量及选择是首要问题。虽然一些国外试剂盒以polyI:C作为标准品，但其识别能力的差异可能导致定量误差。因此，研发高纯度、定量准确的dsRNA标准品至关重要。mRNA疫苗的自免疫原性部分来源于残留的dsRNA杂质，影响其稳定性和效力，化学修饰核苷酸的引入有助于降低这种免疫原性。针对不同修饰类型的dsRNA，通过选择合适的标准品可以确保准确定量，从而提升mRNA疫苗的生产质量。综合考虑不同识别性的抗体以及对dsRNA序列的影响，优化抗体的选取可以有效减少变量干扰，确保检测结果的准确性。今后，针对这一领域，**环亚集团·AG88**也将致力于推动更多创新解决方案的发展，以满足mRNA疫苗大规模生产的需求。